固相窣取-气质联用法测定吡虫啉在茶叶中残留量

吡虫啉是一种新型硝基亚甲基杀虫剂，具有高效、广谱、长效的特点。它具有胃毒性和触杀作用。其有效成分为1-(6-氯吡啶-3-吡啶基甲基)-N-硝基咪唑-2-基胺，分子式为C9H10CIN5O2。其杀虫机制主要是选择性抑制昆虫神经系统中的烟酸乙酰胆碱酯酶受体，从而阻断昆虫中枢神经系统的正常传导。

导致瘫痪和害虫死亡。近年来，吡虫啉已广泛应用于茶叶生产，主要用于防治茶假眼小绿叶蝉。目前，吡虫啉在日本肯定列表中的MRL含量为100毫克/千克，而在欧盟EC149/2008中为0.05毫克/千克。韩国和其他国家也提出了茶叶中吡虫啉残留的检测要求。

目前，国内外已有吡虫啉残留检测方法的相关报道，包括蔬菜和水果中的检测方法，大部分采用HPLC-UV法或液相色谱-串联质谱法检测，但尚无固相萃取-气相色谱/串联质谱法检测茶叶中吡虫啉残留的报道。因此，茶叶中吡虫啉固相萃取-气相色谱/质谱检测方法的研究和建立，对提高吡虫啉残留检测方法的快速性、简便性和经济性具有一定的参考意义。

1材料和方法

1.1仪器和试剂1.1.1仪器

安捷伦7890A-5975C气相色谱-质谱(气相色谱-质谱)，安捷伦，美国；上海瑞丽科学仪器有限公司CS501旋转式蒸发器；IKA T10均质机，IKA德国；天津阿格拉公司VM06型6位大容量负压固相萃取装置。

1.1.2试剂

季峥六合源，丙酮和乙酸乙酯分析纯，杭州化学试剂有限公司；乙腈为色谱纯，天津四友医学生物有限公司；天津阿格拉公司6ML三相萃取塔；吡虫啉标准(纯度≥95%)，由德国埃伦斯托弗博士

1.1.3茶叶样品

国家茶叶质量监督检验中心提供。

1.1.4标准溶液的制备

精确称量吡虫啉标准品，用乙腈超声溶解，制备100微克/毫升标准母液。使用时，将标准储备溶液稀释成不同浓度的标准溶液。

1.2样品预处理

1.2.1样品制备

按照国标8303-2002制备样品。

1.2.2萃取与纯化

据文献报道，乙腈对吡虫啉有较好的萃取效率，对卤代碱农药有理想的萃取效果，两者均在70%以上，乙腈对基质有较大的选择性，因此提取液中色素和脂质含量较少，大大方便了后续的纯化过程。

茶含有大量叶绿素、茶红素、茶黄素、胡萝卜素、茶多酚等不确定的干扰物质。尽管乙腈提取可以选择性地去除一些茶基质，但是需要进一步的纯化处理来去除剩余的色素和其他小分子杂质。活性炭柱能很好地吸附色素，氨基柱能有效吸附有机酸和糖，两个柱串联使用净化效果更好。因此，选择乙腈作为实验萃取剂。

(1)提取。称取2.00克粉碎后的茶叶放入10毫升离心管中，加入6毫升人乙腈，以15000转/分钟的速度均匀提取1分钟，以4000转/分钟的速度离心5分钟，取上清液放入200毫升平底烧瓶中。残留物用乙腈反复提取，离心，与两种提取物合并，并在40℃浴中蒸发至约1毫升进行纯化。

<2)固相萃取纯化

1)活化。5ML乙腈/丙酮/乙酸乙酯=3∶2∶1的混合物以每秒1滴的速率通过TPT固相萃取柱，并保持柱湿润。

2)洗脱。浓缩液用洗脱液洗涤至固相萃取柱，以每秒1滴的速度通过小柱，收集在100毫升圆底烧瓶中；用20ML混合洗脱液(乙腈/丙酮/乙酸乙酯=333623601)洗脱固相萃取柱4次，并收集在20ML圆底烧瓶中。

3)恒定体积。40℃减压浓缩至1毫升，吹干，用季峥路堤定容至5毫升，进行气相色谱-质谱检测。

1.2测定条件

色谱柱:DB-1701应时毛细管柱(30M * 0.25MM * 0.25UM)载气:氦氦氦，纯度≥99.999%。流速为1.2毫升/分钟。注入口温度290℃；injec

1.4方法回收率

在农药残留检测中，检测方法的可靠性通常是通过在空白样品中加入一定浓度的标准溶液，然后检测其添加的回收率来测定的。在本试验中，将标准溶液加入空白样品中，茶叶样品中吡虫啉的加入量为0.08-1.60毫克/千克，然后根据上述样品处理方法进行处理，以检测样品中吡虫啉的实际浓度并计算加入的回收率。

1.5定性和定量方法

选择质量大且吡虫啉相对丰富的碎片离子作为定量离子，根据此原理进一步选择1-3个碎片离子作为定性离子，根据定量离子和定性离子是否一起流出和丰度比确定样品中是否含有目标化合物，定量离子积分用于定量。

2结果与讨论

2.1气相色谱-质谱操作条件的测定

sim可有效消除茶叶中基质相对复杂造成的基质干扰。实验证明，该仪器的分析方法杂质峰少，分离效果好，基线稳定，保留时间适中。

2.2标准曲线

吡虫啉注射量的峰面积以绝对注射量为横坐标，峰面积为纵坐标，通过确定吡虫啉绝对注射量为0.02毫克/升、0.2毫克/升、0.4毫克/升、0.8毫克/升和1.6毫克/升时的峰面积绘制而成。

结果表明，注射浓度与峰面积呈良好的线性关系，相关系数r？=0.9927 .回归方程如下:

y=116.76x 21.262

2.3方法的回收率试验

add回收率试验根据上述色谱条件和检测步骤进行。结果如表2所示。结果表明，在0.08-1.60毫克/公斤范围内，茶叶中吡虫啉的回收率为85.27%-95.88%。变异系数小于8%.通过上述方法测量的检测器的最小可检测量为4.00 * 10%？g、样品的最低检测浓度为0.018毫克/千克

2.4精密度实验

对吡虫啉添加浓度为0.80毫克/千克的茶叶样品分别重复此方法5次。实验结果如表3所示。可见，该方法的相对标准偏差小于5%，精密度符合要求。

3结论

吡虫啉是一种中毒性农药，市场广阔。因此，建立稳定的检测方法尤为重要。这对我国安全农产品的检测具有重要的现实意义。

从以上实验结果和讨论可以看出，该方法是一种快速、准确、有效的茶叶农药残留检测方法。预处理采用乙腈作为提取溶剂，不仅能有效提取多种农药，而且对茶叶中的复杂基质具有选择性，从而有效降低基质效应。纯化过程中使用的TPT柱可以吸收大部分色素和糖类而不保留目标化合物，从而提高了检测灵敏度。从测试结果可以看出，回收率和标准偏差基本满足测试要求。

在定性和定量方法中，传统的当量循环密度和当量循环密度通过化合物的保留时间来定性，只能归类为半定性；MSD的特点是保留时间、标准文库搜索和片段离子丰度比，从而有效减少假阳性。在定量方面，MSD的选择性离子监测方法可以在一定程度上提高化合物的检出限。因此，该检测方法可用于茶叶的无公害绿色食品标准检测。此外，该方法还可用于出口茶叶的农药残留检测。