不同茶树品种Y氨基丁酸含量及谷氨酸脱羚酶活性的研究

γ-氰基丁酸(γ-氨基丁酸)广泛存在于干燥的动物和植物中，是中枢神经系统中的一种抑制性神经递质。它具有降低血压、增强脑细胞代谢、促进长期记忆等生理活性。1”:谷氨酸去盖酶

(谷氨酸脱羧酶能特异性催化谷氨酸去头形成γ-氨基丁酸。据报道

茶叶有较高的6分贝力“1。根据中国农业科学院茶叶研究所的研究，6AD在茶叶中的活性因品种不同而不同，导致不同品种茶叶中γ-氨基丁酸含量不同。然而，关于不同茶树品种γ-氨基丁酸含量与γ-氨基丁酸活性之间关系的报道很少。测定GADit力有两种方法:(1)co的测定,

(2)IRT GABA的定量测定。γ-氨基丁酸的定量测定因其方便、准确而成为谷氨酸脱羧酶活性的首选方法。γ-氨基丁酸的测定主要包括酶法、色谱-质谱、柱色谱荧光测定、毛细管电泳、毛细管气相色谱、高效液相色谱第一颜色法、氨基酸自动分析仪和电泳等.然而，这些方法大多用于医学领域，并且价格昂贵，并且适于大量的定量分析。因此，本研究以13种不同茶树品种为对象，采用纸色谱法定量测定不同品种茶叶中γ-氨基丁酸含量和γ-氨基丁酸光泽度的差异。同时，基于性别差异和信息技术差异对不同品种的“茶”进行聚类分析，旨在筛选特定的茶品种，为“γ-氨基丁酸茶”的生产提供科学依据。

1材料和方法

DHG-101电热恒温干燥箱:江苏省吴江市新安独立烘烤

1.1 1 #tj茶叶茶树实验用的13个茶树品种的鲜叶采自

华南农业大学实验茶园。采摘标准为一芽两叶，

1 1 2主试剂Y，氯丁醇标准，氨基酸制备标准，茚

三酮，正丁醇，游动乙醇，硫酸铜，乙醇，磷酸盐缓冲液和巯基乙醇，均可商购。

11 3主仪器

色谱柱，液体转移棺:购自广州京科化学仪器有限公司

AB204-N电子天平:上海梅特勒-托利多仪器有限公司

DK-8D电动恒温水浴锅:北京永光医疗仪器厂

RE-52A旋转蒸发器:上海亚龙生化仪器厂

SHZ-D(三)循环水真空泵:巩义市裕华仪器有限公司

CR22GII高速冷冻方案:日立

紫外-2800紫外分光光度计:上海龙尼科仪器有限公司

Leicikou H米:上海京科仪器有限公司

DHG-101电热恒温干燥箱:江苏省吴江市新安独立烘烤

箱厂

1 2蜂蜜试验方法

1.2.1加巴米里丁

称取制备好的品种鲜叶和真空处理3小时后的茶叶各10克，研磨后加入100毫升沸水浸泡1h，过滤。 γ-氨基丁酸提取物的制备方法是加入70%2的乙醇，旋转蒸发一定时间后静置30分钟，置于离心机中，以每秒钟的速度离心5分钟。

1 2 1 2纸色谱法测定国产茶叶#γ-氨基丁酸

新华3号滤纸的含量，并吸取8 yl#样品。取样线距滤纸边缘2.5厘米，样品间距为2。Ocm将取样滤纸条放入装有显影剂的色谱柱中进行色谱分析。用喷雾法将i290.4%茚三酮均匀喷在层析纸上，放入电热恒温干燥箱中干燥90分钟。c烘烤10

miri。切掉符合标准的斑点，用体积分数为750小时乙醇=2∶38的洗脱液洗脱。在520 nm处比色测定。彼得等人测定了Og茶叶鲜叶中γ-氨基丁酸的活性，研磨成浆液，在4℃条件下加入10毫升ph为5.8、30匹巯基乙醇的磷酸盐缓冲液，转移到离心管中，放入离心机中，在4℃和13000转/分钟条下离心10分钟。上清液是粗酶提取物。取1mI底物

溶液(1%葡萄糖，pH 5.8)和iml粗酶溶液，在40℃水浴中反应2h，然后转移到沸水中煮沸5min，离心得到上清液。上午

(水)=41.1。其中，用显影剂ⅴ(正丁醇)ⅴ(冰醋酸)ⅳ(木材)=733603: 1的分离效果不理想。而展开剂V

(正丁醇):V[冰乙基醚):V(水)=4: 11虽然在2 2自然条件下的分离效果，不同茶树品种的γ-氨基丁酸含量是丑陋的γ-氨基丁酸

目测分析

γ-氨基丁酸含量和不同茶树品种鲜叶γ-氨基丁酸活性测定

结果见表1，茶树中6AA的含量和固体茶树品种中6AD的活性是不同的

i， 13个茶树品种中，富蕴6号鲜叶γ-氨基丁酸含量高于其他品种(5.44毫克/克)，而黄志祥鲜叶γ-氨基丁酸含量最高(2.049 pmol/30分钟)。 脱落酸含量和谷氨酸脱羧酶活性的显著差异分析表明，鲜叶的

jABA含量和谷氨酸脱羧酶活性存在显著差异。

1.231 “mol/30 min。四川类型包括fS8品种，GAD

根据6AD活动的差异，对1 3个茶歇品种的鲜叶进行聚类分析，得到聚类分析图(Dun2)。当相似系数为0.13时，13

品种分为3组(见表3)。其中，第一类包括3个pti

种，这些种的谷氨酸脱羧酶活性高，平均值为1.981 ymol/30min。

第二类包括2个GAD活性高的品种，平均值为

1.231 “mol/30 min。四川类型包括fS8品种，GAD

活性相对较低，平均值为0.653 pmol/30min。

通过粪便堆积分析发现，第一批娄茶树种均为大叶种:在这两种

ii茶树种中，留兰香为大叶种，富蕴6号为富鼎达

白茶和云南大叶种的杂交品种。谷氨酸脱羧酶活性低于一级，但也高于一级。然而.茶类树种为中小叶树种，GADi活性相对较低。因此，在不同茶树品种中，大叶种的gadi活性一般高于中小叶种。

3总结与讨论

茶树中γ-氨基丁酸含量和6AD活性受多种因素影响，其中

中变基因型起决定性作用。本研究结果表明，不同茶树品种间6ABA含量和谷氨酸脱羧酶活性存在显著差异。真空处理3h后，鲜叶6ABA含量、6BAA含量和6ADi活性均有显著差异。13个茶树品种可分为3类粪便，其中第一类包括3个大

叶种，均具有较高的6ADi活性，平均值为1.981 ymol/30min。第二类“位居第二:第……类包括8种小叶中期物种，其中谷氨酸脱羧酶活性低于第一类”。由于茶叶中谷氨酸脱羧酶活性与γ-氨基丁酸含量密切相关，因此谷氨酸脱羧酶活性高的品种6也具有较强的脱落酸富集能力。从这项研究中可以发现，“从大叶茶品种中更容易筛选出GADi活性高茶树品种，从而为富含GABAIIJ的茶叶生产提供品种选择的依据”。

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l71粪便演讲严一，杨京辉，朱桂梅，小婷“叶洪州，郭健，潘一楼糙米原料yt氨

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